Оценка результатов анализа образцов высушенных пятен крови для серологического мониторинга эпизоотических и зоонозных патогенов у домашних свиней
Высушенные пятна крови (Dried blood spots\DBS) представляют собой стабильную и экономичную матрицу для биологических образцов, которая может быть собрана с минимальной инвазивностью. Несмотря на их широкое применение в медицинской практике, использование DBS в ветеринарной диагностике пока ограничено. Целью настоящего исследования была разработка и валидация протоколов элюирования DBS для коммерческого иммуноферментного анализа (ELISA) с целью выявления антител к вирусу гепатита Е (HEV), вирусу африканской чумы свиней (ASFV) и вирусу болезни Ауески (ADV) у домашних свиней.
DBS были подготовлены из образцов крови, стабилизированной ЭДТА, а высушенные пятна сыворотки (DSS) — из сыворотки. Дополнительно были подготовлены образцы DBS после добавления антител в кровь здоровых свиней. Для определения оптимальных протоколов элюирования были исследованы различные параметры, включая тип и объём элюирующего буфера, время инкубации дисков в элюирующем буфере и объём элюата, используемого для последующего анализа.
После определения оптимальных протоколов для каждого патогена было проведено тестирование 52 образцов DBS в трёх независимых экспериментах. Диагностическая эффективность была оценена путём сравнения результатов иммуноферментного анализа элюатов DBS с соответствующими образцами сыворотки или плазмы.
Относительно HEV, только один из 52 образцов DBS не соответствовал качественным результатам анализа плазмы ни в одном из трёх запусков. Для ASFV все 52 образца DBS продемонстрировали полное соответствие качественным результатам соответствующих образцов жидкости. Для ADV два образца показали ложноотрицательные результаты во всех трёх испытаниях.
Результаты исследования подтверждают, что при оптимизированном протоколе элюирования DBS могут служить эффективной и экономически целесообразной альтернативой образцам цельной крови, сыворотки или плазмы для крупномасштабного серологического скрининга с использованием коммерческих ELISA-тест систем. Метод демонстрирует сопоставимую диагностическую чувствительность и специфичность, что обосновывает его применение в программах полевого мониторинга. Рекомендуется проведение дальнейшей валидации с использованием полевых образцов и крупномасштабных испытаний для подтверждения полученных данных и расширения области применения DBS в ветеринарной практике.
